ຖົງນີ້ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການແຍກ DNA ຂອງພະລັງງານໄຟຟ້າ
Buffer TBE ແມ່ນເປັນປະໂຫຍດໂດຍສະເພາະສໍາລັບການແຍກ DNA fragments ຂະຫນາດນ້ອຍກວ່າ (MW <1000), ເຊັ່ນ: ຜະລິດຕະພັນຂະຫນາດນ້ອຍຂອງ ການ ຍ່ອຍສະຫຼາຍ enzyme .
TBE ມີຄວາມສາມາດບົ່ມຫຼາຍກວ່າເກົ່າແລະຈະໃຫ້ຄວາມລະອຽດຂື້ນກວ່າ TAE buffer . Buffer TAE ແມ່ນການແກ້ໄຂບັນຫາຂອງ base Tris, ອາຊິດອາຊີຕິກແລະ EDTA (Tris-acetate-EDTA).
TBE ໂດຍທົ່ວໄປແມ່ນມີລາຄາແພງກວ່າ TAE ແລະ inhibits DNA ligase, ຊຶ່ງອາດເຮັດໃຫ້ເກີດບັນຫາຖ້າຫາກວ່າຂັ້ນຕອນການກັ່ນຕອງ DNA ແລະຂັ້ນຕອນຕໍ່ໄປນີ້ແມ່ນມີຈຸດປະສົງ. ມີສາມຂັ້ນຕອນທີ່ງ່າຍດາຍທີ່ປະຕິບັດຕາມ, ຮຽນຮູ້ວິທີເຮັດ TBE buffer. ມັນບໍ່ຄວນໃຊ້ເວລາຫຼາຍກ່ວາປະມານ 30 ນາທີທີ່ຈະສ້າງຄວາມຖີ່ນີ້. ນີ້ແມ່ນວິທີ:
ການກະກຽມແກ້ໄຂຫຼັກຊັບຂອງ EDTA
ຄວນແກ້ໄຂ EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) ໃຫ້ລ່ວງຫນ້າ. EDTA ຈະບໍ່ຫມົດໄປສູ່ການແກ້ໄຂຈົນກ່ວາ pH ແມ່ນດັດແປງປະມານ 8.0. ສໍາລັບການແກ້ໄຂຫຼັກ 500 ມິນລິລິດຂອງ EDTA 0.5 M, ໃຫ້ນ້ໍາຫນັກ 93.05 ກຼາມຂອງເກືອ EDTA disodium (FW = 372.2). ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ເຮັດໃຫ້ລະລາຍໃນ 400 milliliters ນ້ໍາ deionized ແລະປັບ pH ກັບ NaOH. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ໃຫ້ໃສ່ທາງອອກໃຫ້ເປັນປະລິມານສຸດທ້າຍ 500 ມິນລິລິດ.
ການກະກຽມຜະລິດຕະພັນຫຼັກຂອງ TBE
ຜະລິດຕະພັນທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ (5x) ຂອງ TBE ໂດຍການຊັ່ງນໍ້າຫນັກ 54 ກຣາມ Tris base (FW = 121.14) ແລະ 275 g boric acid (FW = 6183) ແລະເຮັດໃຫ້ລະລາຍນ້ໍາປະມານ 900 ml. ຫຼັງຈາກນັ້ນໃຫ້ຕື່ມ 20 ມິນລິລິດຂອງ EDTA 0.5 M (pH 80) ແລະປັບປຸງແກ້ໄຂໃຫ້ເປັນປະລິມານສຸດທ້າຍຂອງ 1 ລິດ.
ການແກ້ໄຂນີ້ສາມາດຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງແຕ່ວ່າຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການໄຫຼວຽນຂອງອາກາດເກົ່າ. ເກັບຮັກສາໄວ້ໃນຖົງແກ້ວໃນຖົງແກ້ວແລະຖິ້ມຖ້າມີຝົນຕົກ.
ການກະກຽມວິທີການເຮັດວຽກຂອງ TBE
ສໍາລັບ electrophoresis gel agarose, buffer TBE ສາມາດນໍາໃຊ້ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ 0.5x (dilution 1:10 ຂອງຫຼັກຊັບ concentrated). ຫລຸດຜ່ອນການແກ້ໄຂຫຼັກໂດຍ 10x ໃນນ້ໍາທີ່ຖືກຫລອກລວງ. ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ solute ສຸດທ້າຍແມ່ນ 45 mM Tris-borate ແລະ EDTA 1 mM. ກະແສຟອງແມ່ນກຽມພ້ອມສໍາລັບໃຊ້ໃນການ ໃຊ້ gel agarose .
ເຈົ້າຕ້ອງການຫັຍງ
ເພື່ອເຮັດໃຫ້ TBE buffer, ທ່ານຈໍາເປັນຕ້ອງມີພຽງສີ່ຊະນິດ. ລາຍການທີ່ຍັງເຫຼືອໃນບັນຊີລາຍຊື່ນີ້ແມ່ນອຸປະກອນ. ສີ່ສານທີ່ຕ້ອງການຄືເກືອ EDTA disodium, ຖານ Tris, ອາຊິດ boric ແລະນ້ໍາ deionized.
ສໍາລັບອຸປະກອນ, ທ່ານຈະຕ້ອງມີລະດັບ pH ແລະມາດຕະຖານມາດຕະຖານ, ຕາມຄວາມເຫມາະສົມ. ນອກເຫນືອຈາກນັ້ນ, ທ່ານຈະຕ້ອງມີ 600 milliliters ແລະ 1500 milliliter beakers ຫຼື flasks. ການສ້ອມແປງຄວາມຕ້ອງການຂອງອຸປະກອນຂອງທ່ານແມ່ນຈົບລົງຈາກແກນແລະເຮັດໃຫ້ແທ່ນຂີ້ເຫຍື້ອແລະກະຕຸ້ນເຕົາ.
ກວດເບິ່ງຄັງສິນຄ້າຢູ່ຫ້ອງທົດລອງທີ່ທ່ານຈະໃຊ້ເພື່ອໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າທ່ານມີທຸກສິ່ງທີ່ທ່ານຕ້ອງການກ່ອນທີ່ທ່ານຈະເລີ່ມຕົ້ນ. ບໍ່ມີຫຍັງທີ່ຮ້າຍແຮງກວ່າເກົ່າທີ່ຕ້ອງຢຸດຢູ່ເຄິ່ງກາງຂອງການກະກຽມວິທີແກ້ໄຂຍ້ອນວ່າທ່ານແລ່ນອອກຈາກວັດຖຸທີ່ເຫມາະສົມ.
ຖ້າຫາກວ່າຫ້ອງທົດລອງຂອງທ່ານຢູ່ໃນໂຮງຮຽນຫຼືຢູ່ບ່ອນເຮັດວຽກຂອງທ່ານ, ໃຫ້ກວດເບິ່ງພະນັກງານທີ່ເຫມາະສົມເພື່ອເບິ່ງວ່າພວກເຂົາມີລາຍການທັງຫມົດໃນຫຼັກຊັບ. ການເຮັດດັ່ງນັ້ນອາດຊ່ວຍປະຢັດເວລາແລະພະລັງງານຂອງທ່ານໃນທີ່ສຸດ.