ເຄື່ອງມືສໍາລັບວິສະວະກໍາໂປຼຕີນ

01 ປະຕິກິລິຢາໂຊ່ Polymerase

02 Restriction Enzymes

ການຄົ້ນພົບຂອງ enzymes ເອີ້ນວ່າ endonucleases ຈໍາກັດໄດ້ມີຄວາມສໍາຄັນກັບ ວິສະວະກໍາໂປຼຕີນ . enzym ເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຕັດ DNA ຢູ່ໃນສະຖານທີ່ສະເພາະໂດຍອີງຕາມລໍາດັບ nucleotide. ຫລາຍຮ້ອຍ enzymes ຈໍາກັດ ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ສາມາດຕັດ DNA ຢູ່ໃນເວັບໄຊທ໌ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ໄດ້ຖືກແຍກອອກຈາກເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ແຕກຕ່າງກັນຫຼາຍ. ການຕັດ DNA ດ້ວຍເອນໄຊມ໌ຈໍາກັດການຜະລິດຊິ້ນສ່ວນຂະຫນາດນ້ອຍຫຼາຍ, ຂະຫນາດທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ເຫຼົ່ານີ້ສາມາດຖືກແຍກອອກໂດຍການນໍາໃຊ້ electrophoresis gel ຫຼື chromatography.

03 Electrophoresis

ການອະທິບາຍ DNA ຈາກວັດທະນະທໍາຂອງຫ້ອງ, ຫຼືການໃຊ້ມັນໂດຍໃຊ້ enzyme ຈໍາກັດຈະບໍ່ໃຊ້ຫຼາຍຖ້າຫາກວ່າພວກເຮົາບໍ່ສາມາດເບິ່ງເຫັນ DNA ໄດ້ - ແມ່ນວ່າ, ຊອກຫາວິທີເພື່ອເບິ່ງວ່າສານສະກັດຂອງທ່ານມີສິ່ງໃດ, ຫຼືຂະຫນາດຂອງທ່ານຂະຫນາດໃດ 'ໄດ້ຕັດມັນເຂົ້າໄປໃນ. ວິທີຫນຶ່ງໃນການເຮັດສິ່ງນີ້ແມ່ນໂດຍການແກະສະຫຼັກໄຟຟ້າ gel. Gels ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບຈຸດປະສົງຕ່າງໆ, ຈາກການເບິ່ງການຕັດ DNA ເພື່ອກວດຫາ DNA inserts ແລະ knockouts.

04 ເຂົ້າຮ່ວມ Two Pieces of DNA

ໃນການຄົ້ນຄວ້າກ່ຽວກັບພັນທຸກໍາ, ມັນມັກຈະຕ້ອງເຊື່ອມຕໍ່ສອງຫຼືຫຼາຍກວ່າ strands DNA ຂອງ, ເພື່ອສ້າງ strands recombinant, ຫຼືປິດເສັ້ນດ່າງວົງທີ່ຖືກຕັດດ້ວຍ enzyme restriction. Enzymes ເອີ້ນວ່າ DNA ligases ສາມາດສ້າງພັນທະບັດ covalent ລະຫວ່າງ chain nucleotide. enzymes DNA polymerase I ແລະ polynucleotide kinase ແມ່ນສໍາຄັນໃນຂະບວນການນີ້, ສໍາລັບການຕື່ມຂໍ້ມູນໃນຊ່ອງຫວ່າງຫຼື phosphorylating ປາຍ 5 ', ຕາມລໍາດັບ.

05 ການຄັດເລືອກຕົວ DNA ແບບຕົວຕົນເອງແບບຂະຫນາດນ້ອຍ

ເອກະສານ DNA ຂະຫນາດນ້ອຍທີ່ບໍ່ແມ່ນສ່ວນຫນຶ່ງຂອງລະບົບພັນທຸກໍາຂອງເຊື້ອແບັກທີເລຍ, ແຕ່ມີຄວາມສາມາດໃນການຈໍາລອງຕົນເອງ, ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກເປັນ plasmid. Plasmids ແມ່ນມັກຈະຖືກນໍາໃຊ້ເປັນ vectors ໃນການຂົນສົ່ງ gen ໃນລະຫວ່າງຈຸລິນຊີ. ໃນດ້ານຊີວະວິທະຍາ, ເມື່ອມີໂປຼແກຼມທີ່ມີຄວາມສົນໃຈແລ້ວ, ໂປຼຕີນແລະ plasmid ແມ່ນຖືກກໍານົດໂດຍ enzyme restriction, ພວກເຂົາໄດ້ຖືກກັນຮ່ວມກັນສ້າງ DNA ທີ່ recombinant. DNA ທີ່ມີເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ (bacteriophage) ຍັງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເປັນ vector, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບ cosmids, plasmids recombinant ທີ່ມີເຊື້ອແບັກທີວີ.

06 ວິທີການຍ້າຍ Vector ເຂົ້າໄປໃນ Cell Host

ຂະບວນການໂອນວັດຖຸພັນກ່ຽວກັບ vector ເຊັ່ນ plasmid ເປັນຈຸລັງໃຫມ່, ເອີ້ນວ່າການປ່ຽນແປງ. ເຕັກນິກນີ້ຮຽກຮ້ອງໃຫ້ຈຸລັງຂອງເຈົ້າໄດ້ຮັບການປ່ຽນແປງຕໍ່ສິ່ງແວດລ້ອມຊຶ່ງເຮັດໃຫ້ພວກເຂົາ "ມີຄວາມຮູ້" ຫຼືເປັນຄວາມເຂົ້າໃຈຕໍ່ເວກເຕີຊົ່ວຄາວ. Electroporation ແມ່ນຫນຶ່ງໃນເຕັກນິກດັ່ງກ່າວ. Plasmid ຂະຫນາດໃຫຍ່, ການປະສິດທິພາບທີ່ຕ່ໍາລົງໂດຍຈຸລັງ. ສ່ວນໃຫຍ່ຂອງ DNA ແມ່ນງ່າຍຫຼາຍໂດຍການນໍາໃຊ້ເຊື້ອແບັກທີວີ, ການ retrovirus ຫຼືໂຣກໄວຣັດອື່ນໆຫຼືສານເຄມີໃນວິທີການທີ່ເອີ້ນວ່າການຖ່າຍທອດ. vectors phage ຫຼື viral ແມ່ນຖືກນໍາໃຊ້ໃນ ຢາປົວພະຍາດ regenerative ແຕ່ອາດຈະເຮັດໃຫ້ການໃສ່ DNA ໃນບາງສ່ວນຂອງ chromosomes ຂອງພວກເຮົາທີ່ພວກເຮົາບໍ່ຕ້ອງການມັນ, ເຊິ່ງກໍ່ໃຫ້ເກີດພາວະແຊກຊ້ອນແລະແມ້ແຕ່ມະເລັງ.

07 ວິທີການເລືອກອົງປະກອບ Transgenic

ບໍ່ແມ່ນຈຸລັງທັງຫມົດຈະໃຊ້ DNA ໃນໄລຍະການປ່ຽນແປງ. ມັນເປັນສິ່ງຈໍາເປັນທີ່ມີວິທີການກວດສອບຄົນທີ່ເຮັດ. ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວ, plasmids ເອົາ Gene ເພື່ອຕ້ານການຕໍ່ຕ້ານເຊື້ອຈຸລິນຊີແລະຈຸລັງ transgenic ສາມາດເລືອກໄດ້ໂດຍອີງໃສ່ການສະແດງຂອງເຊື້ອໂຣກເຫລົ່ານີ້ແລະຄວາມສາມາດໃນການຂະຫຍາຍຕົວໃນສື່ທີ່ປະກອບດ້ວຍຢາຕ້ານເຊື້ອ. ວິທີທາງເລືອກຂອງການເລືອກແມ່ນຂຶ້ນກັບໂປຼແກຼມຕົວຫນັງສືລາຍງານອື່ນໆເຊັ່ນລະບົບ x-gal / lacZ , ຫຼືທາດໂປຼຕີນຈາກ fluorescence ສີຂຽວ, ເຊິ່ງສາມາດເລືອກຕາມສີແລະ fluorescence ຕາມລໍາດັບ.