ວິທີການເຮັດໃຫ້ຈຸລັງປ້ອງກັນການສັກຢາປ້ອງກັນໂຣກ Immunohistochemical ນີ້
ທາດໂປຼຕີນຈາກອາຍຟູເຟດ (PBS) ແມ່ນເປັນການແກ້ໄຂບັນເທົາທີ່ຖືກນໍາໃຊ້ທົ່ວໄປສໍາລັບການຮັກສາລະບົບພູມຕ້ານທານ (IHC) ແລະມັນຖືກນໍາໃຊ້ໃນການຄົ້ນຄວ້າທາງຊີວະພາບ. PBS ແມ່ນສານປະສົມເກືອທີ່ມີນ້ໍາທີ່ມີທາດໂຊດຽມໄຮໂດຼໂຟດຟູດເຟດໂຊດຽມ chloride ແລະໃນບາງກໍລະນີໂພແທດຊຽມ chloride ແລະໂພແທດຊຽມ dihydrogen phosphate.
Immunohistochemical Staining
Immunohistochemistry ຫມາຍເຖິງຂະບວນການຂອງການກວດສອບຕົວຕ້ານທານເຊັ່ນ: ທາດໂປຼຕີນໃນຈຸລັງຂອງສ່ວນຂອງຈຸລັງໂດຍການນໍາໃຊ້ຫຼັກການຂອງສານຕ້ານຕໍ່ຕ້ານໂດຍສະເພາະກັບສັດໃນຈຸລັງຊີວະພາບ.
ການສັກຢາ Immunofluorescent ແມ່ນວິທີການສັກສີ immunohistochemical ຄັ້ງທໍາອິດ.
Antigens ກາຍເປັນສັງກະສີເມື່ອທຽບໃສ່ກັບຢາຕ້ານເຊື້ອທີ່ໃຊ້ fluorescence dyes ເນື່ອງຈາກ antigen-antibody binding reaction. ຂະບວນການນີ້ເກີດຂື້ນໃນເວລາທີ່ມັນເຮັດວຽກໂດຍແສງທີ່ຫນ້າຕື່ນເຕັ້ນຂອງຄວາມຍາວລະຫວ່າງກ້ອງຈຸລະທັດ fluorescent.
ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ osmolarity ແລະ ion ຂອງວິທີແກ້ໄຂກົງກັນກັບຄົນຂອງຮ່າງກາຍຂອງມະນຸດ, ພວກມັນແມ່ນ isotonic.
ສູດສໍາລັບ PBS
ທ່ານສາມາດກຽມ PBS ໃນຫລາຍວິທີ. ມີສູດຈໍານວນຫລາຍ. ບາງຄົນບໍ່ມີໂປຕີນ, ໃນຂະນະທີ່ຄົນອື່ນມີແຄຊຽມຫຼື ແມກນີຊຽມ .
ສູດນີ້ແມ່ນງ່າຍດາຍ. ມັນແມ່ນສໍາລັບ 10X PBS stock solution (0.1M). ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ທ່ານຍັງສາມາດເຮັດໃຫ້ມີການແກ້ໄຂຫຼັກຊັບ 1X, ຫຼືເລີ່ມຕົ້ນດ້ວຍສູດ 10X ນີ້ແລະເຮັດໃຫ້ມັນລຸດລົງໄປ 1X.
ຂະບວນການທັງຫມົດໃຊ້ເວລາປະມານ 10 ນາທີ.
ຕົວເລືອກທີ່ຈະເພີ່ມ Tween ແມ່ນຍັງມີໃຫ້.
ສິ່ງທີ່ທ່ານຈໍາເປັນຕ້ອງເຮັດໃຫ້ PBS Buffer
- Sodium phosphate monobasic (anhydrous)
- Sodium phosphate dibasic (anhydrous)
- Sodium chloride
- ເຮືອຂະຫນາດແລະນ້ໍາຫນັກ
- ແມ່ເຫລໍກແລະແມ່ເຫລໍກເລື່ອນ
- ການກວດສອບ pH ທີ່ຖືກແກ້ໄຂແລະເຫມາະສົມສໍາລັບການແກ້ໄຂ pH
- 1L volumetric flask
- Tween 20 (ທາງເລືອກ)
ວິທີການເຮັດທາດແປ້ງຟູອໍເຟດ Buffered Saline (PBS)
ນ້ໍາຫນັກຕ່ໍາ 10.9 ກຼາມໂຊດຽມ phosphate dibasic (Na2HPO4), 3.2g ຝຸ່ນໂຊດຽມ phosphate monobasic (NaH2PO4), ແລະ 90g sodium chloride (NaCl).
ລະລາຍໃນພຽງນ້ໍາກັ່ນ 1 ລິດ.
ປັບຄ່າ pH ເຖິງ 7.4 ແລະເຮັດໃຫ້ການແກ້ໄຂເຖິງປະລິມານສຸດທ້າຍຂອງ 1L.
ເຮັດຄວາມສະອາດ 10X ກ່ອນທີ່ຈະໃຊ້ແລະປັບປານຖ້າຈໍາເປັນ.
ທ່ານສາມາດເຮັດໃຫ້ມີການແກ້ໄຂ PBS ມີ Tween 20 ສ່ວນຮ້ອຍ 0.5 ໂດຍການເພີ່ມ 5mL Tween 20 ກັບ 1L solution.
Tips for Making PBS Buffer
ເກັບຮັກສາຄວາມຫນາແຫນ້ນໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງຫຼັງຈາກທີ່ທ່ານເຮັດການແກ້ໄຂ PBS.
Reagents ທີ່ບໍ່ແມ່ນ anhydrous ສາມາດທົດແທນໄດ້ແຕ່ວ່າທ່ານຈະຕ້ອງຄິດຄືນໃຫມ່ທີ່ເຫມາະສົມຂອງມະຫາຊົນທີ່ເຫມາະສົມເພື່ອໃຫ້ເຫມາະສົມກັບໂມເລກຸນນ້ໍາ.
ການນໍາໃຊ້ຂອງທາດແປ້ງຟູອໍໄລເຟດ (PBS)
ເກືອເຟືອງຟູອໍເຟດມີການນໍາໃຊ້ຫຼາຍເພາະມັນເປັນ isotonic ແລະບໍ່ເປັນພິດຕໍ່ຈຸລັງທີ່ສຸດ. ມັນສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອເຈືອຈາງສານແລະມັນມັກຈະຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອລ້າງຈຸ່ມຂອງຈຸລັງ. ຕົວຢ່າງ PBS ສາມາດນໍາໃຊ້ເປັນ dilutent ໃນວິທີຕ່າງໆເພື່ອເຮັດໃຫ້ຊີວະໂມເລກຸນແຫ້ງເພາະວ່າໂມເລກຸນນ້ໍາໃນມັນຈະມີໂຄງສ້າງປະມານທາດໂປຼຕີນ, ສໍາລັບຕົວຢ່າງ. ມັນຈະຖືກ "ຕາກແດດ" ແລະບໍ່ມີພູມຕ້ານທານຕໍ່ຫນ້າດິນແຂງ.
pH ຍັງຄົງຄົງແລະສອດຄ່ອງກັບການປ້ອງກັນການທໍາລາຍຂອງຈຸລັງ.
ຟິມບາງໆຂອງນ້ໍາທີ່ພົວພັນກັບສານປ້ອງກັນການປ່ຽນແປງຫຼືການປ່ຽນແປງທີ່ສອດຄ່ອງອື່ນໆ. ຖົງຄາບອນສາມາດໃຊ້ສໍາລັບຈຸດປະສົງດຽວກັນແຕ່ມີປະສິດຕິຜົນຫນ້ອຍ.
PBS ຍັງສາມາດນໍາໃຊ້ເພື່ອໃຊ້ເວລາເປັນເອກະສານອ້າງອີງໃນເວລາທີ່ການວັດແທກ ໂປຕີນ ໃນການດູດຊຶມໃນວົງແຫວນ.