ຖົງນີ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອສຶກສາການເຄື່ອນໄຫວ DNA
ບັຟເຟີນີ້ມີຄວາມເຂັ້ມແຂງ ionic ຕໍ່າແລະຄວາມສາມາດບີບອັດຕໍ່າ. ມັນແມ່ນເຫມາະສົມທີ່ສຸດກັບ electrophoresis ຂອງ DNA ຂະຫນາດໃຫຍ່ (> 20 kb) ແລະຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ຖືກແທນທີ່ເລື້ອຍໆຫຼື recirculated ສໍາລັບໄລຍະເວລາດົນກ່ວາເວລາ (> 4 ຊົ່ວໂມງ).
ດ້ວຍຄວາມຄິດທີ່ວ່າ, ທ່ານອາດຈະຕ້ອງພິຈາລະນາຈໍານວນຫຼາຍຂອງການບີບຕົວ.
ເນື່ອງຈາກວ່າ buffer ແມ່ນງ່າຍທີ່ຈະເຮັດແລະຂັ້ນຕອນສາມາດດໍາເນີນການໄດ້ໄວ, ເຮັດໃຫ້ຫຼາຍກວ່າຫນຶ່ງ batch ໃນເວລາບໍ່ຄວນຈະໂດຍສະເພາະແມ່ນໃຊ້ເວລາຫຼືຍາກທີ່ຈະດຶງອອກ. ການໃຊ້ຄໍາແນະນໍາຂ້າງລຸ່ມນີ້ຄວນໃຊ້ເວລາພຽງ 30 ນາທີເພື່ອເຮັດໃຫ້ TAE buffer. ນີ້ແມ່ນວິທີ:
ການກະກຽມແກ້ໄຂຫຼັກຊັບຂອງ EDTA
ການແກ້ໄຂ EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) ແມ່ນໄດ້ຖືກກຽມໄວ້ກ່ອນເວລາ. EDTA ຈະບໍ່ຫມົດໄປສູ່ການແກ້ໄຂຈົນກວ່າການປັບຕົວຂອງ pH ກັບປະມານ 8.0. ສໍາລັບການແກ້ໄຂຫຼັກ 500 ມິນລິລິດຂອງ EDTA 0.5 M, ໃຫ້ນ້ໍາຫນັກ 93.05 ກຼາມຂອງເກືອ EDTA disodium (FW = 372.2). ລ້າງໃນ 400 ມິນລິລິດນ້ໍາ deionized ແລະປັບ pH ດ້ວຍ sodium hydroxide (NaOH). ເອົາໄປແກ້ໄຂບັນຫາໃຫ້ກັບປະລິມານສຸດທ້າຍຂອງ 500 ມິນລິລິດ.
Whip Up ການແກ້ໄຂຫຼັກຊັບຂອງ TAE
ເຮັດໃຫ້ການແກ້ໄຂຫຼັກຂອງສານສະກັດ (50x) ທີ່ເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ TAE ດ້ວຍນໍ້າຫນັກ 242 ກຼາມຂອງຖານ Tris (FW = 121.14) ແລະເຮັດໃຫ້ລະລາຍນ້ໍາປະມານ 750 milliliters ຂອງນ້ໍາທີ່ຖືກເຈືອຈາງ.
ເອົາໃຈໃສ່ໂດຍລະມັດລະວັງ 571 ມິນລິລິດຂອງອາຊິດ glacial ແລະ 100 ມິນລິລິດຂອງ EDTA 0.5 M (pH 8.0). ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ປັບປຸງແກ້ໄຂໃຫ້ເປັນປະລິມານສຸດທ້າຍຂອງ 1 ລິດ. ການແກ້ໄຂຫຼັກຊັບນີ້ສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ. pH ຂອງ buffer ນີ້ບໍ່ຖືກປັບແລະຄວນຈະມີປະມານ 8.5.
ການກະກຽມການແກ້ໄຂການເຮັດວຽກຂອງ TAE
ການແກ້ໄຂການເຮັດວຽກຂອງ 1x TAE buffer ແມ່ນເຮັດໄດ້ໂດຍພຽງພໍ diluting ການແກ້ໄຂຫຼັກໂດຍ 50x ໃນນ້ໍາ deionized.
ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງໂຊດຽມສຸດທ້າຍແມ່ນ 40 mM. Tris-acetate ແລະ EDTA 1 mM. ກະແສຟອງແມ່ນກຽມພ້ອມສໍາລັບໃຊ້ໃນການໃຊ້ gel agarose.
ສິ່ງທີ່ທ່ານຕ້ອງການສໍາລັບ Buffer
ນັບຕັ້ງແຕ່ການເຮັດໃຫ້ TAE buffer ພຽງແຕ່ຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີຄໍາແນະນໍາຢ່າງວ່ອງໄວແລະງ່າຍດາຍ, ຈໍານວນອຸປະກອນທີ່ຈໍາເປັນສໍາລັບມັນບໍ່ແມ່ນຫຼາຍເກີນໄປ. ທ່ານພຽງແຕ່ຕ້ອງການເກືອ EDTA disodium, ຖານ Tris ແລະອາຊິດອາຊີຕິກ glacial.
ການເຮັດໃຫ້ຄວາມຫນາແຫນ້ນຍັງຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີ pH meter ແລະມາດຕະຖານມາດຕະຖານ, ຕາມຄວາມເຫມາະສົມ. ນອກນັ້ນທ່ານຍັງຈະຕ້ອງໄດ້ 600 milliliter ແລະ 1500 milliliters beakers ຫຼື flasks ເຊັ່ນດຽວກັນກັບຈອກທີ່ຈົບການສຶກສາ. ສຸດທ້າຍ, ທ່ານຕ້ອງການນ້ໍາ deionized, stir bars, ແລະ stir ແຜ່ນ.
Wrapping Up
ບ່ອນໃດທີ່ທ່ານວາງແຜນທີ່ຈະເຮັດໃຫ້ຕົວບີບຕົວ - ຢູ່ໃນສະຖານທີ່ໂຮງຮຽນ, ສະຖານທີ່ເຮັດວຽກຫຼືສະຖານທີ່ອື່ນເຊັ່ນ: ເຮືອນຂອງທ່ານ? ກວດເບິ່ງຄັງສິນຄ້າກ່ອນທີ່ທ່ານຈະເລີ່ມຕົ້ນເພື່ອໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າທ່ານມີອຸປະກອນທັງຫມົດຂ້າງເທິງສໍາລັບ TAE buffer.
ຖ້າທ່ານບໍ່ຕ້ອງຈ່າຍຄ່າວັດສະດຸ, ທ່ານຄວນແນະນໍາໃຫ້ເຮັດຄວາມຖີ່ທີ່ຢູ່ນອກເຮືອນຂອງທ່ານ. ທ່ານສາມາດສັ່ງຊື້ອຸປະກອນທີ່ທ່ານຕ້ອງການອອນໄລນ໌ຫຼືໄປຢ້ຽມຢາມຮ້ານພິເສດສໍາລັບພວກເຂົາ.