ປະຕິກິລິຍາລະບົບ Polymerase Chain (PCR) ແມ່ນຫຍັງ?

PCR stands for polymerase chain reaction , a molecular biology technique for amplifying segments of DNA, by generating multiple copies by using enzyme DNA polymerase under conditions controlled. ຂະນະດຽວກັນເປັນພຽງແຕ່ສໍາເນົາເອກະສານຂອງເອກະສານຫຼືເຊື້ອໂຣກ DNA ເທົ່ານັ້ນສາມາດຖືກຄັດລອກເຂົ້າໄປໃນຫຼາຍໆລ້ານແຜ່ນ, ຊ່ວຍໃຫ້ການກວດຫາສີຍ້ອມແລະເຕັກນິກການເບິ່ງເຫັນອື່ນໆ.

ການພັດທະນາໃນປີ 1983, ຂະບວນການຂອງ PCR ໄດ້ເຮັດໃຫ້ມັນເປັນໄປໄດ້ທີ່ຈະປະຕິບັດ sequencing DNA ແລະລະບຸຄໍາສັ່ງຂອງ nucleotides ໃນແຕ່ລະ genes.

ວິທີການໃຊ້ຮອບວຽນຮ້ອນຫຼືການເຮັດຄວາມຮ້ອນແລະເຮັດໃຫ້ເຢັນຂອງປະຕິກິລິຍາສໍາລັບ DNA melting ແລະ replication. ໃນຂະນະທີ່ PCR ສືບຕໍ່, DNA "ໃຫມ່" ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນແມ່ແບບສໍາລັບການຈໍາລອງແລະການປະຕິບັດລະບົບຕ່ອງໂສ້ເກີດຂຶ້ນ, ຈໍານວນຂະຫຍາຍຕົວແບບເອກະສານ DNA.

ເຕັກໂນໂລຊີ PCR ແມ່ນໄດ້ນໍາໃຊ້ໃນຫຼາຍໆດ້ານຂອງຊີວະວິທະຍາລວມທັງ ວິສະວະກໍາໂປຼແກຼມ , ການໂຄ່ນລົ້ມ, ການວິນິດໄສ DNA (fingerprinting), ການກວດຫາພໍ່ແມ່, ການບົ່ງມະຕິຂອງພະຍາດຕິດເຊື້ອແລະ / ຫຼືການຕິດເຊື້ອ, ແລະການວິເຄາະຂອງຕົວຢ່າງສິ່ງແວດລ້ອມ.

ໃນການພິພາກສາ, ໂດຍສະເພາະແມ່ນ, PCR ແມ່ນມີຜົນປະໂຫຍດໂດຍສະເພາະຍ້ອນມັນຂະຫຍາຍເຖິງເຖິງຈໍານວນນ້ອຍທີ່ສຸດຂອງຫຼັກຖານ DNA. PCR ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອວິເຄາະ DNA ທີ່ມີອາຍຸຫລາຍພັນປີແລະເຕັກນິກເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກໍານົດທຸກສິ່ງທຸກຢ່າງຈາກແມ່ຫມີມານ 800,000 ປີແກ່ມະມ່ວງຈາກທົ່ວໂລກ.

ຂັ້ນຕອນຂອງ PCR ມີດັ່ງນີ້:

• ການເລີ່ມຕົ້ນ: ຂັ້ນຕອນນີ້ແມ່ນມີຄວາມຈໍາເປັນພຽງແຕ່ສໍາລັບ DNA polymerases ທີ່ຕ້ອງການ PCR ຮ້ອນ. ປະຕິກິລິຍາໄດ້ຮັບຄວາມຮ້ອນໃນລະຫວ່າງ 94 ແລະ 96 ° C ແລະໄດ້ຈັດຂຶ້ນປະມານ 1 ຫາ 9 ນາທີ.

• Denaturation: ຖ້າຂັ້ນຕອນບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງເລີ່ມຕົ້ນ, ການກໍາຈັດເປັນຂັ້ນຕອນທໍາອິດ. ປະຕິກິລິຍາໄດ້ຮັບຄວາມຮ້ອນໃຫ້ 94-98 ° C ໃນ 20-30 ວິນາທີ. ພັນທະຂອງໄຮໂດເຈນຂອງເອກະສານເອກະສານ DNA ຖືກຂັດຂວາງແລະໂມເລກຸນເອກະສານ DNA ດຽວຖືກສ້າງຂື້ນ.
• ລະບົບຕ່ອງໂສ້: ອຸນຫະພູມປະຕິກິລິຍາຫຼຸດລົງລະຫວ່າງ 50 ຫາ 65 ° C ແລະເກັບໄວ້ໃນເວລາ 20-40 ວິນາທີ. ຕົວຫນັງສືລວບລວມຂໍ້ມູນກ່ຽວກັບເອກະສານ DNA ແບບດຽວ. ອຸນຫະພູມແມ່ນມີຄວາມສໍາຄັນຫຼາຍໃນລະຫວ່າງຂັ້ນຕອນນີ້. ຖ້າມັນຮ້ອນເກີນໄປ, primer ອາດຈະບໍ່ຕິດ. ຖ້າມັນເຢັນເກີນໄປ, primer ອາດຈະບໍ່ສົມບູນແບບ. ສາຍພັນທີ່ດີແມ່ນເກີດຂຶ້ນເມື່ອລໍາດັບເລີ້ມຕົ້ນສອດຄ່ອງກັບລໍາດັບແບບຟອມ.

• ການຂະຫຍາຍ / ການຍືດຫຍຸ່ນ: ອຸນຫະພູມໃນຂັ້ນຕອນນີ້ແຕກຕ່າງກັນໄປຕາມປະເພດຂອງ polymerase. DNA polymerase synthesizes DNA strand ໃຫມ່ຫມົດ.
• ຂັ້ນຕອນສຸດທ້າຍ: ຂັ້ນຕອນນີ້ແມ່ນດໍາເນີນຢູ່ທີ່ 70-74 ° C ສໍາລັບ 5-15 ນາທີຫຼັງຈາກຮອບສຸດທ້າຍ PCR.
• ຖືສຸດທ້າຍ: ຂັ້ນຕອນນີ້ແມ່ນທາງເລືອກ. ອຸນຫະພູມແມ່ນເກັບຮັກສາຢູ່ທີ່ 4-15 ° C ແລະ strops ຕິກິຣິຍາ.

ຂັ້ນຕອນນີ້ແບ່ງອອກເປັນ 3 ຂັ້ນຕອນຄື:

• ການຂະຫຍາຍຕົວ ໃນລະດັບຄວາມນິຍົມ : ໃນທຸກໆວົງຈອນ, ຜະລິດຕະພັນ (ສ່ວນ DNA ທີ່ຖືກກໍານົດໄວ້) ແມ່ນເພີ່ມຂຶ້ນສອງເທົ່າ.
• ຂັ້ນຕອນຂອງການຫຼຸດລົງ: ໃນຖານະເປັນ DNA polymerase ສູນເສຍກິດຈະກໍາແລະ consumes reagents, ປະຕິກິລິຍາຊ້າ.
• Plateau: ບໍ່ມີຜະລິດຕະພັນເພີ່ມເຕີມ.