ລະດັບຂອງຄວາມບໍລິສຸດຂອງທາດໂປຼຕີນທີ່ຕ້ອງການແມ່ນຂຶ້ນກັບການນໍາໃຊ້ທາດໂປຼຕີນຈາກຈຸດປະສົງ.
ສໍາລັບບາງຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ, ສານສະກັດຈາກທໍາມະຊາດແມ່ນພຽງພໍ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ສໍາລັບການນໍາໃຊ້ອື່ນໆ, ເຊັ່ນ: ໃນອາຫານແລະຢາ, ຄວາມຕ້ອງການຄວາມສະອາດສູງ. ເພື່ອບັນລຸວິທີການຂຸດຄົ້ນທາດໂປຼຕີນຈໍານວນຫຼາຍນີ້ຖືກນໍາໃຊ້ໂດຍປົກກະຕິ, ໃນຂັ້ນຕອນຂອງຂັ້ນຕອນການຂຸດຄົ້ນ.
ຂັ້ນຕອນການຂຸດຄົ້ນແຕ່ລະທາດໂປຼຕີນແຕ່ລະຄັ້ງກໍ່ມີຜົນໃນການສູນເສຍຜະລິດຕະພັນບາງຢ່າງ. ດັ່ງນັ້ນ, ຍຸດທະສາດການກັ່ນຕອງໂປຕີນທີ່ເຫມາະສົມແມ່ນຫນຶ່ງໃນທີ່ລະດັບສູງສຸດຂອງການບໍລິສຸດແມ່ນບັນລຸໄດ້ໃນຂັ້ນຕອນຫນ້ອຍ. ການຄັດເລືອກຂັ້ນຕອນທີ່ຕ້ອງໃຊ້ແມ່ນຂຶ້ນກັບຂະຫນາດ, ຄ່າ, ຄວາມສະອາດແລະຄຸນສົມບັດອື່ນໆຂອງທາດໂປຼຕີນເປົ້າຫມາຍ. ເຕັກນິກດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້ແມ່ນເຫມາະສົມທີ່ສຸດສໍາລັບການຍ່ອຍທາດໂປຼຕີນຈາກ cytosolic ດຽວ. ການກັ່ນຕອງຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ cytosolic complexes ແມ່ນມີຄວາມສັບສົນຫຼາຍແລະມັກຈະຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີວິທີການທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.
ຂັ້ນຕອນທໍາອິດສໍາລັບການບໍລິສຸດໂປຼຕີນ
ຂັ້ນຕອນທໍາອິດໃນການບໍລິ ໂພກ ທາດໂປຼຕິນ intracellular (ພາຍໃນເຊນ) ແມ່ນການກະກຽມ ສານສະກັດຈາກທໍາມະຊາດ .
ສານສະກັດດັ່ງກ່າວຈະປະກອບດ້ວຍທາດປະສົມທີ່ສັບສົນທັງຫມົດຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ cell cytoplasm ແລະບາງ macromolecules, cofactors ແລະສານອາຫານຕ່າງໆ. ສານສະກັດຈາກທໍາມະຊາດອາດຈະຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການນໍາໃຊ້ບາງຢ່າງໃນຊີວະວິທະຍາ, ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຖ້າຄວາມບໍລິສຸດເປັນບັນຫາ, ຂັ້ນຕອນການຖອກນ້ໍາຫຼັງຈາກນັ້ນຕ້ອງໄດ້ປະຕິບັດຕາມ.
ສານສະກັດຈາກທາດໂປຼຕີນທຽມແມ່ນຖືກກະກຽມໂດຍການກໍາຈັດຂອງ debris cellular ທີ່ຜະລິດໂດຍ cell lysis, ເຊິ່ງໄດ້ບັນລຸໄດ້ໂດຍນໍາໃຊ້ສານເຄມີແລະ enzymes , sonication ຫຼືຝຣັ່ງ Press. ຂີ້ເຫຍື້ອຖືກເອົາອອກໂດຍ centrifugation, ແລະ supernatant ແມ່ນການກູ້ຄືນ. ການກຽມຕົວຂອງທາດໂປຼຕີນ extracellular ສາມາດໄດ້ຮັບໂດຍການຖອນຈຸລັງໂດຍ centrifugation.
ສໍາລັບການນໍາໃຊ້ ເຕັກໂນໂລຊີ biotechnology ບາງ, ມີຄວາມຕ້ອງການສໍາລັບ enzyme thermostable ໄດ້ : Enzymes ທີ່ສາມາດທົນທານຕໍ່ອຸນຫະພູມສູງໂດຍບໍ່ມີການ denaturing, ແລະໃນຂະນະທີ່ຮັກສາກິດຈະກໍາທີ່ສູງ. ອົງການຈັດຕັ້ງທີ່ຜະລິດໃຫ້ເຂົາເຈົ້າແມ່ນບາງຄັ້ງເອີ້ນວ່າ extremophiles. ວິທີງ່າຍໆໃນການເຮັດຄວາມສະອາດໂປຼຕີນທີ່ທົນຕໍ່ຄວາມຮ້ອນແມ່ນການກໍາຈັດທາດໂປຼຕີນອື່ນໆໃນການຜະສົມໂດຍການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນ, ຫຼັງຈາກນັ້ນເຮັດໃຫ້ຄວາມເຢັນ (ເພື່ອໃຫ້ enzyme ທີ່ມີຄວາມຮ້ອນສູງສາມາດປະຕິຮູບຫຼື redissolve ຖ້າຈໍາເປັນ).
ຂັ້ນຕອນການປົນເປື້ອນລະດັບປານກາງ
ໃນໄລຍະຜ່ານມາ, ຂັ້ນຕອນທີສອງທົ່ວໄປເພື່ອການຍ່ອຍທາດໂປຼຕີນຈາກສານສະກັດຈາກນ້ໍາມັນແມ່ນໂດຍການ ຕົກຄ້າງ ໃນການແກ້ໄຂດ້ວຍຄວາມເຂັ້ມແຂງຂອງ osmotic (ຄືການແກ້ໄຂເກືອ). ອາຊິດນິວເຄຼິກໃນສານສະກັດຈາກນ້ໍາມັນສາມາດຖືກເອົາອອກໂດຍການລວບລວມອາຫານລວມທີ່ຜະລິດດ້ວຍທາດໂປຼຕິນແຊນຕາຕິນຊີຕິນຫຼື protamine sulfate.
ການປະສົມປະສານໂປຼຕີນປົກກະຕິແມ່ນເຮັດດ້ວຍການນໍາໃຊ້ sulfon ammonium ເປັນເກືອ.
ທາດໂປຼຕີນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຈະ precipitate ໃນຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ ammonium sulfate . ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວ, ທາດໂປຼຕີນທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງໂມເລກຸນທີ່ສູງຂຶ້ນໃນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຕ່ໍາຂອງທາດອາຍເມນີອຽມ. ການສະອາດເກືອບໍ່ໄດ້ນໍາໄປສູ່ການມີທາດໂປຼຕີນທີ່ຖືກ purified ສູງແຕ່ສາມາດຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນທາດໂປຼຕີນທີ່ບໍ່ຕ້ອງການບາງຢ່າງໃນການປະສົມແລະການສຸມໃສ່ຕົວຢ່າງ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ເກືອໃນການແກ້ໄຂໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກໂດຍການນ້ໍາຍ່ອຍຜ່ານທໍ່ cellulose porous, ການກັ່ນຕອງ, ຫຼືການຊູນ Chromatography exclusion gel.
ໂປຣແກຣມ biotech ທີ່ທັນສະໄຫມມັກຈະໃຊ້ປະໂຫຍດຈາກຊຸດຂອງສິນຄ້າທີ່ມີຢູ່ໃນທຸລະກິດທີ່ສະຫນອງການແກ້ໄຂພ້ອມທີ່ຈະເຮັດສໍາລັບຂັ້ນຕອນມາດຕະຖານ. ການກັ່ນຕອງທາດໂປຼຕີນແມ່ນມັກປະຕິບັດໂດຍການກັ່ນຕອງແລະຖັນການກັ່ນຕອງຂອງເກຍ. ທັງຫມົດທີ່ທ່ານຕ້ອງເຮັດແມ່ນປະຕິບັດຕາມຄໍາແນະນໍາແລະເພີ່ມປະລິມານສິດທິຂອງການແກ້ໄຂທີ່ຖືກຕ້ອງແລະລໍຖ້າເວລາທີ່ກໍານົດໄວ້ໃນເວລາທີ່ເກັບກໍາ eluant (ສິ່ງທີ່ອອກມາຈາກປາຍຂອງຄໍລໍາ) ໃນທໍ່ທົດສອບໃຫມ່.
- ວິທີການ chromatographic ສາມາດນໍາໃຊ້ໄດ້ໂດຍໃຊ້ຖັນ bench-top ຫຼືອຸປະກອນ HPLC ອັດຕະໂນມັດ. ການແຍກໂດຍ HPLC ສາມາດເຮັດໄດ້ໂດຍວິທີການປ່ຽນຊ້ໍາ, ການແລກປ່ຽນ ion ຫຼືວິທີການຍົກເວັ້ນຂະຫນາດ, ແລະຕົວຢ່າງທີ່ພົບໂດຍອາເລ diode ຫຼືເຕັກໂນໂລຊີ laser.
ການເບິ່ງເຫັນທາດໂປຼຕີນແລະການປະເມີນການບໍລິສຸດ
- Chromatography Reverse-phase (RPC) ແຍກທາດໂປຼຕີນໂດຍອີງໃສ່ຄວາມ ເຂັ້ມຂົ້ນ ຂອງເຂົາເຈົ້າ. ເຕັກນິກນີ້ແມ່ນການຄັດເລືອກທີ່ສູງແຕ່ຕ້ອງໃຊ້ສານລະລາຍປອດສານອິນຊີ. ທາດໂປຼຕີນບາງຊະນິດຖືກປະຕິເສດຢ່າງຖາວອນໂດຍການລະລາຍແລະຈະສູນເສຍການເຮັດວຽກໃນໄລຍະ RPC. ດັ່ງນັ້ນວິທີນີ້ບໍ່ໄດ້ຖືກແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ສໍາລັບການນໍາໃຊ້ທັງຫມົດ, ໂດຍສະເພາະຖ້າມັນເປັນສິ່ງຈໍາເປັນສໍາລັບທາດໂປຼຕີນເປົ້າຫມາຍທີ່ຈະຮັກສາກິດຈະກໍາ.
- Chromatography ການແລກປ່ຽນໄອອອນ ຫມາຍເຖິງການແຍກທາດໂປຼຕີນຈາກການ ຄິດໄລ່ . ຄໍລໍາສາມາດກຽມພ້ອມສໍາລັບການແລກປ່ຽນເງິນຕາ anion ຫຼືການແລກປ່ຽນ cation. ຖັນ ການແລກປ່ຽນ Anion ປະກອບມີໄລຍະ stationary ທີ່ມີຄ່າບວກທີ່ດຶງດູດທາດໂປຼຕີນທີ່ຖືກກະທົບທາງລົບ. ຖັນ ການແລກປ່ຽນ Cation ແມ່ນເມັດທີ່ຖືກຄິດໄລ່ທາງດ້ານລົບ, ທີ່ດຶງດູດທາດໂປຼຕີນທີ່ມີຄ່າໃນທາງບວກ. ການຍືດເຍື້ອຂອງທາດໂປຕີນທີ່ເປົ້າຫມາຍແມ່ນເຮັດໄດ້ໂດຍການປ່ຽນແປງ pH ໃນຄໍລໍາເຊິ່ງຜົນໃນການປ່ຽນແປງຫຼື neutralization ຂອງກຸ່ມທີ່ເປັນປະໂຫຍດຂອງແຕ່ລະທາດໂປຼຕີນ.
- chromatography ຂະຫນາດອອກ ( ການກັ່ນຕອງ gel ) ແຍກທາດໂປຼຕີນຈາກຂະຫນາດໃຫຍ່ຈາກຂະຫນາດນ້ອຍນັບຕັ້ງແຕ່ molecules ຂະຫນາດໃຫຍ່ທີ່ເດີນທາງໄດ້ໄວຂຶ້ນໂດຍຜ່ານ polymer ຂ້າມເຊື່ອມຕໍ່ໃນຖັນ Chromatography. ໂປຣຕີນທີ່ມີຂະຫນາດໃຫຍ່ບໍ່ເຫມາະສົມກັບຮູປະທໍາຂອງໂປຣເຟີຣ໌ໃນຂະນະທີ່ໂປຼຕີນຂະຫນາດນ້ອຍເຮັດແລະໃຊ້ເວລາດົນກວ່າໃນການເດີນທາງຜ່ານຖັນ Chromatography ຜ່ານເສັ້ນທາງໂດຍກົງຫນ້ອຍກວ່າ. ການດູດຊືມແມ່ນເກັບໃນຊຸດຂອງທໍ່ແຍກທາດໂປຼຕີນໂດຍອີງໃສ່ເວລາການຍືດຫຍຸ່ນ. ການກັ່ນຕອງນ້ໍາຕານເປັນເຄື່ອງມືທີ່ມີປະໂຫຍດສໍາລັບການສຸມໃສ່ຕົວຢ່າງຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກທາດໂປຼຕີນເປົ້າຫມາຍທີ່ຖືກເກັບລວບລວມໃນປະລິມານການຍືດຫຍຸ່ນນ້ອຍກວ່າທີ່ໄດ້ເພີ່ມໄວ້ໃນຖັນ. ເຕັກນິກການກັ່ນຕອງທີ່ຄ້າຍຄືກັນອາດຈະຖືກນໍາໃຊ້ໃນໄລຍະການຜະລິດໂປຼຕີນຂະຫນາດໃຫຍ່ເນື່ອງຈາກວ່າຄ່າໃຊ້ຈ່າຍຂອງພວກເຂົາແມ່ນສູງ.
- Chromatography Affinity ແມ່ນເທກນິກທີ່ເປັນປະໂຫຍດສໍາລັບ "ການຂັດ" ຫຼືສໍາເລັດຂະບວນການຂຸດຄົ້ນໂປຼຕີນ. ແກ່ນໃນຖັນ Chromatography ແມ່ນເຊື່ອມຕໍ່ກັບສາຍພັນທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ໂດຍສະເພາະກັບທາດໂປຼຕີນທີ່ເປົ້າຫມາຍ. ທາດໂປຼຕີນຈາກນັ້ນຖືກໂຍກຍ້າຍອອກຈາກຖັນໂດຍການລ້າງດ້ວຍການແກ້ໄຂບັນຈຸມີ ligands ຟຣີ. ວິທີນີ້ໃຫ້ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ບໍລິສຸດແລະກິດຈະກໍາທີ່ສູງທີ່ສຸດທຽບໃສ່ກັບເຕັກນິກອື່ນໆ.
- SDS-PAGE ແມ່ນ electrophoresis gel polyacrylamide, ປະຕິບັດໃນ SDS (sodium dodecyl sulfate) ເຊິ່ງພົວພັນກັບທາດໂປຼຕີນທີ່ເຮັດໃຫ້ພວກເຂົາມີນ້ໍາຫນັກທາງລົບສູງສຸດ. ເນື່ອງຈາກວ່າຄ່າບໍລິໂພກຂອງໂປຣຕີນທັງຫມົດແມ່ນເທົ່າທຽມກັນເທົ່າທຽມກັນ, ວິທີນີ້ແຍກພວກເຂົາເກືອບທັງຫມົດໂດຍອີງໃສ່ຂະຫນາດ. SDS-PAGE ແມ່ນມັກໃຊ້ເພື່ອທົດສອບຄວາມບໍລິສຸດຂອງໂປຼຕີນຫຼັງຈາກແຕ່ລະຂັ້ນຕອນໃນຊຸດ. ໃນຂະນະທີ່ໂປຼຕີນທີ່ບໍ່ຕ້ອງການຖືກລົບອອກເທື່ອລະກ້າວຈາກການປະສົມ, ຈໍານວນຂອງວົງທີ່ເບິ່ງເຫັນໃນ SDS-PAGE gel ຖືກຫຼຸດລົງ, ຈົນກວ່າຈະມີພຽງແຕ່ແຖບທີ່ເປັນຕົວແທນຂອງທາດໂປຼຕີນທີ່ຕ້ອງການ.
- Immunoblotting ແມ່ນເຕັກນິກການສະແດງໂປຼຕີນທີ່ນໍາໃຊ້ໃນການປະສົມປະສານກັບ Chromatography ຄວາມສໍາຄັນ. Antibodies ສໍາລັບທາດໂປຼຕີນທີ່ສະເພາະແມ່ນຖືກນໍາໃຊ້ເປັນ ligands ໃນຄໍລໍາ chromatography affinity. ທາດໂປຼຕີນທີ່ເປົ້າຫມາຍແມ່ນເກັບໄວ້ໃນຖັນ, ຫຼັງຈາກນັ້ນເອົາອອກໂດຍການລ້າງຖັນທີ່ມີການແກ້ໄຂເກືອຫຼືຕົວແທນອື່ນໆ. ປະຕິກິລິຍາຂອງພູມຕ້ານທານທີ່ມີຕໍ່ການເຕີບໂຕແລະການເຕີບໂຕຂອງພືດ. ສໍາລັບໃຊ້ກັບບັນດາເອກະສານກ່ຽວກັບພາກພື້ນດັ່ງກ່າວກ່ອນເກີດການປ່ຽນແປງລະບອບການປົກຄອງ;
ແຫຼ່ງຂໍ້ມູນ:
Zubay G 1988. Biochemistry, 2nd Edition. Macmillan Publishing Co, New York, NY, USA.
Amersham Pharmacia Biotech 1999. ປື້ມຄູ່ມືການບໍລິໂພກໂປຕີນ, ເອກະສານ AB. Amersham Pharmacia Biotech Inc. New Jersey, USA. http: // wwwbiochemuiowaedu / donelson / Database \ 20items / proin_purification_handbookpdf